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    實驗動物各種體液、骨髓的采集方法

    發布時間: 2010-03-31  點擊次數: 3002次

    一、消化液的采集
    (一) 唾液
    1. 直接抽取法 在急性實驗中, 可用吸管直接插入動物口腔或唾液腺導管抽吸唾液,此法非常簡單,但從口腔抽吸唾液會有雜質混入。
    2. 制造腮腺瘺法 在慢性實驗中,收集狗的唾液,要用外科手術方法將腮腺導管開口移向體外,即以腮腺導管為中心,切成一直徑約2~3cm的圓形粘膜片,將此粘膜片,與周圍組織分開,穿過皮膚切口引到頰外,將帶有導管開口的粘膜片與周圍的皮膚縫合,腮腺分泌的唾液就流出頰外。這種方法可以收集到較純凈的唾液。
    (二)胃液 
    1. 直接收集胃液法 急性實驗時,先將動物麻醉,將插胃管經口插入胃內,在灌胃管的出口連一注射器,用此注射器可收集到胃液,此法適用于狗等大型動物。如是大鼠,需手術剖腹,從幽門端向胃內插入一塑料管,再由口腔經食道將一塑料管插入前胃,用pH7.5、35℃左右的生理鹽水,以12ml/h的流速灌胃,收集流出液,進行分析。
    2. 制備胃瘺法 在慢性實驗中,收集胃液多用胃瘺法,如全胃瘺法、巴氏小胃瘺法、海氏小胃瘺法等。制備小胃是將動物的胃分離出一小部分,縫合起來形成小胃,主胃與小胃互不相通,主胃進行正常消化,從小胃可收集到純凈的胃液。應用該法,可以待動物恢復健康后,在動物清醒狀態下反復采集胃液。
    (三)胰液和膽汁
    在動物實驗中,主要是通過對胰總管和膽總管的插管而獲得胰液或膽汁。狗的胰總管開口于十二指腸降部,在緊靠腸壁處切開胰管,結扎固定并與導管相連,即可見無色的胰液流入導管。大鼠的胰管與膽管匯集于一個總管,在其入腸處插管固定,并在近肝門處結扎和另行插管,可分別收集到胰液和膽汁。
    有時也可通過制備胰瘺和膽囊瘺來獲得胰液和膽汁。 

    二、腦脊液的采集
    (一)狗、兔腦脊液的采集通常采取脊髓穿刺法:穿刺部位在兩髂連線中點稍下方第七腰椎間隙。動物輕度麻醉后,側臥位固定,使頭部及尾部向腰部盡量彎曲,剪去第七腰椎周圍的被毛。消毒后操作者在動物背部用左手姆、食指固定穿刺部位的皮膚,右手持腰穿刺針垂直刺入,當有落空感及動物的后肢跳動時,表明針已達椎管內( 蛛網膜下腔),抽去針芯,即見腦脊液流出。如果無腦脊液流出,可能是沒有刺破蛛網膜。輕輕調節進針方向及角度,如果腦脊液流的太快,插入針芯稍加阻塞,以免導致顱內壓突然下降而形成腦疝。 
    (二)大鼠腦脊液的采集可采用枕大孔直接穿刺法 
    在大鼠麻醉后,頭部固定于定向儀上。頭頸部剪毛、消毒,用手術刀沿縱軸切一縱行切口(約2cm)用剪刀鈍性分離頸部背側肌肉。為避免出血,zui深層附著在骨上的肌肉用手術刀背刮開,暴露出枕骨大孔。由枕骨大孔進針直接抽取腦脊液。抽取完畢逢好外層肌肉、皮膚。刀口處可撒些磺胺藥粉,防止感染。采完腦脊液后,應注入等量的消毒生理鹽水,以保持原來腦脊髓腔的壓力。

    三、骨髓的采集
    1. 大鼠、小鼠骨髓的采集:用頸椎脫臼法處死動物,剝離出胸骨或股骨,用注射器吸取少量的Hank平衡鹽溶液,沖洗出胸骨或股骨中全部骨髓液。如果是取少量的骨髓作檢查,可將胸骨或股骨剪斷,將其斷面的骨髓擠在有稀釋液的玻片上,混勻后涂片涼干即可染色檢查。
    2. 大動物骨髓的采集:狗等大動物骨髓的采集可采取活體穿刺方法。 先將動物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮膚,然后估計好皮膚到骨髓的距離,把骨髓穿刺針的長度固定好。操作人員用左手把穿刺點周圍的皮膚繃緊,右手將穿刺針在穿刺點垂直刺入,穿入固定后,輕輕左右旋轉將穿刺針鉆入,當穿刺針進入骨髓腔時常有落空感。狗骨髓的采集,一般采用髂骨穿刺。
    狗等大動物常用的骨髓穿刺點:胸骨:穿刺部位是胸骨體與胸骨柄連接處。肋骨:穿刺部位是第5~7肋骨各點的中點。脛骨:穿刺部位是股骨內側、靠下端的凹面處。如果穿刺采用的是肋骨,穿刺結束后要用膠布封貼穿刺孔,防止發生氣胸。 

    四、腹水的采集
    抽取狗等大動物腹水,讓狗按自然站立位固定,穿刺部位在恥骨前緣與臍之間,腹中線兩側。剪毛消毒,局部浸潤麻醉。操作者左手姆、食指緊繃穿刺部位的皮膚,右手控制穿刺深度做垂直穿刺。注意不可刺的太深,以免刺傷內臟。穿刺針進入腹腔后,腹水多時可見因腹壓高而自動流出。腹水太少可輕輕回抽,并同時稍稍轉動一下針頭,一旦有腹水流出,立即固定好針頭及注射器的位置連續抽取。
    抽取大鼠、小鼠的腹水方法簡單,用左手拇指及食指捏住動物頸部皮膚,無名指、小手指及手掌夾住其尾巴固定好動物,使其腹部略朝上,在腹股溝和腹中線之間,消毒皮膚,用8號針頭刺入腹腔,如腹壓高腹水自然流出,如腹水太少,可借助注射器抽取。
    抽腹水時注意不可速度太快,腹水多時不要一次大量抽出,以免因腹壓突然下降導致動物出現循環功能障礙等問題。五、尿液的采集
    常用的采集方法較多,一般在實驗前需給動物灌服一定量的水。
    (一)代謝籠法:此法較常用,適用于大、小鼠。將動物放在特制的籠內。動物排便時,可以通過籠子底部的大小便分離漏斗將尿液與糞便分開,達到采集尿液的目的。
    由于大、小鼠尿量較少,操作中的損失和蒸發,各鼠膀胱排空不一致等原因,都可造成較大的誤差,因此一般需收集5小時以上的尿液,zui后取平均值。 
    (二)導尿法:常用于雄性兔、狗。動物輕度麻醉后,固定于手術臺上。由尿道插入導尿管(頂端應用液體石蠟涂抹),可以采到沒有受到污染的尿液。
    (三)壓迫膀胱法:在實驗研究中,有時為了某種實驗目的,要求間隔一定的時間,收集一次尿液,以觀察藥物的排泄情況。動物輕度麻醉后,實驗人員用手在動物下腹部加壓,手要輕柔而有力。當加的壓力足以使動物膀胱括約肌松馳時,尿液會自動由尿道排出。此法適用于兔、狗等較大動物。
    (四)輸尿管插管法:動物麻醉后,固定于手術臺上。剪毛、消毒,于恥骨聯合上緣之上在正中線做皮膚切口(長約3~4cm),沿腹中線切開腹壁及腹膜,找到膀胱翻出腹外。辨認清楚輸尿管進入膀胱背側的部位(膀胱三角)后,細心地分離出兩側輸尿管,分別在靠近膀胱處穿線結扎。在離此結扎點約2cm 處的輸尿管近腎段下方穿一根絲線。用眼科剪在管壁上剪一斜向腎側的小切口,分別插入充滿生理鹽水的細塑料管( 插入端剪成斜面),用留置的線結扎固定。可見到尿滴從插管中流出( 頭幾滴是生理鹽水),塑料管的另一端與帶刻度的容器相連或接在記滴器上, 以便記錄尿量。 在適用過程中應經常活動一下輸尿管插管,以防阻塞。在切口和膀胱處應蓋上溫濕的生理鹽水紗布。
    (五)膀胱插管法:腹部手術同輸尿管插管。將膀胱翻出腹外后,用絲線結扎膀胱頸部,阻斷它同尿道的通路。然后在膀胱頂部避開血管剪一小口,插入膀胱漏斗,用絲線做以荷包縫合固定。漏斗正對著輸尿管的入口處。注意不要緊貼膀胱后壁而堵塞輸尿管。下端接橡皮管插入帶刻度的容器內以收集尿液。
    (六)穿刺膀胱法:動物麻醉后固定于手術臺上,在恥骨聯合之上腹正中線剪毛,消毒后進行穿刺,入皮后針頭應稍改變一下角度,以避免穿刺后漏尿。
    (七)剖腹采尿法:同穿刺法做術前準備,皮膚準備范圍應大一點。剖腹暴露膀胱,操作者的左手用無齒小平鑷夾住一小部分膀胱,右手持針在小鑷夾住的膀胱部位直視穿刺抽取尿液。可避免針頭貼在膀胱壁上而抽不出尿液。
    (八)反射排尿法:適用于小鼠,因小鼠被人抓住尾巴提起時排便反射比較明顯。故需采取少量尿液時,可提起小鼠,將排出的尿液接到帶刻度的容器內。 

    六、精液的采集
    (一)人工陰道采集精液(semen):體型較大的動物,如狗、豬、羊等,可用一專門的人工陰道套在發情的雄性動物陰莖上,采集精液。也可將人工陰道置入雌性動物的陰道內,待動物交配完畢后,取出人工陰道采集精液。還可將人工陰道固定在雌性動物外生殖器附近,雄性動物陰莖開始插入時,立即將其陰莖移入人工陰道內,待其射精完畢后,采集人工陰道內的精液。
    (二)陰道栓采集精液:大小鼠雌雄交配后,24小時內可在雌性動物陰道口出現白色透明的陰道栓,這是雄鼠的精液和雌鼠陰道分泌液在陰道內凝固而成的,取陰道栓涂片染色可觀察到凝固的精液。
    (三)其它采集精液法:將發情的雌性動物放在雄性動物一起,當雄性動物被刺激發情后,立即將雄性動物分開,再用人工法刺激其射精。也可按摩雄性動物的生殖器或用電刺激其發情中樞或性敏感區,使其射精。 

    七、陰道內液體的采集
    (一)棉拭子法:用消毒棉拭子旋轉插入動物陰道內,然后在陰道內輕輕轉動幾下后取出,即可進行涂片鏡檢。有的適用如大、小鼠等,陰道液較少,取其陰道液時,可用先浸濕后又擠盡無菌生理鹽水的棉拭子取陰道液,這種棉拭子比干棉拭子容易插入陰道。對體型較大的實驗動物,也可先按摩或刺激其陰部,而后再采集其陰道液。
    (二)滴管法:用消毒的鈍頭滴管吸取少量的無菌生理鹽水插入動物陰道內,然后擠出生理鹽水后又吸入,反復幾次,吸取陰道沖洗液滴于玻片上制片、染色鏡檢。
    (三)刮取法:用光滑的玻璃小勺或牛角制的小刮片慢慢插入陰道內,在陰道壁輕輕刮取一點陰道內含物,進行涂片鏡檢。 

    八、胸水的采集
    收集胸水常采用穿刺法。如果實驗不要求動物繼續存活,也可用處死動物剖胸取胸水。穿刺部位在動物脊側腋后線胸壁第11~12肋間隙穿刺較安全。此部位是肺zui下界之外側,既可避免損傷肺組織造成氣胸,又易采集在隔肋竇的胸水。此外,也可在腹側胸壁近胸骨左側緣第4~5肋間隙穿刺。
    動物穿刺部位剪毛、消毒,操作者左手拇、食指繃緊肋間穿刺部位的皮膚,用帶夾的橡皮管套上12~14號針頭,沿肋骨前緣小心地垂直刺入。當有阻力消失或落空感時,表示已穿入胸腔。再接上針管,除去夾子,緩緩抽取胸水。如果有條件在穿刺針頭與注射器之間連一個三通管,但應注意正確運用三通管。穿刺結束迅速拔出針頭,輕揉穿刺部位,促進針孔閉合并注意消毒。
    操作中嚴防空氣進入胸腔,始終保持胸腔負壓。穿刺應用手控制針頭的深度,以防穿刺過深刺傷肺臟。

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