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    造成血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒失誤的原因

    發(fā)布時間: 2015/10/9  點擊次數(shù): 645次
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    下面分析血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法。
    1 加樣 可能原因: 1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣; 2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。解決辦法: 1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2) 加樣后及時放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
    2 孵育 可能原因: 1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*; 2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法: 1) 貼封片或加蓋; 2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。 
    3洗板 可能原因: 1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。 3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法: 1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干; 2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
    4 顯色 可能原因: 1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑; 2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法: 1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流; 3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。 
    5終止 可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。

    血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒收集樣品、處理及保存方法:
    1.  血清:需使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,在操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
    2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心機(jī)離心30分鐘取上清。
    3.  細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn) 離心機(jī)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
    4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心機(jī)離心10分鐘取上清。
    5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

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